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對熒光-PCR法的熒光染料說明

更新時間:2021-08-13點擊次數(shù):811
   熒光-PCR法不同于其他PCR的地方在于PCR過程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴增產(chǎn)物量的變化,熒光信號變量與擴增產(chǎn)物變量成正比,并通過足夠靈敏的自動化儀器實現(xiàn)對熒光的采集和分析以達到對原始模板量定量的目的。
  熒光基團通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下,熒光基團吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量:
  1.光能:許多熒光基團吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量,并且發(fā)射光的峰值大于吸收峰。
  2.熱能:某些熒光基團吸收光能后,能量轉(zhuǎn)換為熱量擴散到環(huán)境中。
  3.轉(zhuǎn)移給臨近的分子:當(dāng)臨近的分子滿足發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的要求時,能量從熒光基團傳遞到臨近的分子。
  當(dāng)某個熒光基團的發(fā)射譜與另一熒光基團的吸收光譜發(fā)生重疊,且兩個基團距離足夠近時,能量可以從短波長(高能量)的熒光基團傳遞到長波長(低能量)的熒光基團,這個過程稱為熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET),實際相當(dāng)于將短波長熒光基團釋放的熒光屏蔽。
  熒光-PCR法區(qū)別于其他PCR法主要有以下優(yōu)點:
  1.全封閉反應(yīng),無需PCR后處理;
  2.特異性強,靈敏度高;
  3.采用對數(shù)期分析,摒棄終點數(shù)據(jù),定量準確;
  4.定量范圍寬,可達到10個數(shù)量級;
  5.儀器在線式實時監(jiān)測,結(jié)果直觀,避免人為判斷;
  6.可實現(xiàn)一管雙檢或多檢;
  7.操作安全,縮短時間,提高效率;
  8.利于自動化和聯(lián)網(wǎng)管理。

TEL:021-61210612

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