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熒光-PCR法中普通PCR和qPCR引物區(qū)別解析

更新時間:2023-03-13點擊次數(shù):1093
   熒光-PCR法試劑盒具備高特異性,與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;檢測靈敏度可達(dá)10-100拷貝;該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;多種雙重PCR檢測及三重PCR檢測試劑盒。
  熒光-PCR法中的普通PCR和qPCR引物設(shè)計原則有哪些區(qū)別呢?
  一、二者的相同之處
  序列的查找是一致的;
  序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段;
  選取合適的擴(kuò)增片段大小
  避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續(xù)配對;
  避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu);
  Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%;
  引物之間的TM相差避免超過2℃;
  引物的3’端避免出現(xiàn)3個或3個以上連續(xù)相同的堿基。
  二、二者的不同之處
  qPCR產(chǎn)物長度PCR要求在300bp以內(nèi),一般先選80-150bp之間;多對目的基因同時擴(kuò)增,文獻(xiàn)上查來的引物條件會不同,需要設(shè)計盡可能條件一致的引物;目的基因含量比較低時,需要設(shè)計靈敏度比較高的引物;相對電泳法,qPCR靈敏度比較高,對引物的要求更高,引物二聚體要少,熔解曲線要求單一產(chǎn)物;PCR的目的是進(jìn)行定量或者相對定量,對擴(kuò)增的效率有要求,對引物的二級結(jié)構(gòu)要求高。
  普通PCR引物根據(jù)實驗的要求不同,長度一般是從150bp到幾千bp不等;對二級結(jié)構(gòu)要求沒有qPCR高;對擴(kuò)增效率要求不高;可選用梯度PCR儀,選擇不同退火溫度,對引物退火溫度要求不需要一致。

TEL:021-61210612

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