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多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家

產(chǎn)品簡介

多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
HK3檢測試劑盒公司產(chǎn)品僅用于科研實驗,不做其他用途!

更新時間:2021-03-13
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家

 英文名稱

 Pasteurella multocidaPCR

 貨號

 LZP7114

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
Sodium lactate正丁酰氯  98%2,3-二氯-1,4-萘醌 98%

Sodium DL-lactate氯代異烷 CP,97%1-代萘 98%

Calcium citrate tetrahydrate氯代異烷 GR,99%1-硝基萘 CP,94%

Ferric citrate氯乙酰氯 98%1-硝基萘 99%

Sodium DL-ma1ate3-氯新戊酰氯 98%β-萘酚 AR

Sodium DL-ma1ate trihydrate氯代正烷 99%β-萘酚 熒光指示劑, ≥99.0% (GC

Zinc gluconate二氯乙酰氯 98%3,5-二氯-1-溴苯 98%

Calcium D-gluconate酸乙酯 97%酮縮甘油 98%

Ferric phosphate dihydrate酸乙酯 AR,99% 3,5-二氯苯異酸酯 97%

Iron(III) phosphate tetrahydrate異丁酰氯 98%N-甲基鄰苯二胺鹽酸鹽 99%

DL-lactic acid lithium s酸甲酯 AR,99.0%1,2,3,5-四氯苯 96%

Sodium citrate dihydrate*酯 99%1,2,3,5-四氯苯 分析標準品

Sodium D-gluconate三氯乙酰氯 98%1,3,5-三氯苯 99%

CNP-Afu特戊酰氯 98%1,3,5-三氯苯標準溶液 0.109mg/ml,基體: 異辛烷

Potassium sorbate正戊酰氯 98%1,2,4,5-四氯苯 98%

Calcium DL-malate AR,98%1,2,4,5-四氯苯標準溶液 0.104mg/ml,基體:異辛烷

艾地苯醌(標準品)IL-6 (D3K2N) Rabbit mAbRNF150  環(huán)指蛋白150抗體

伊潘立酮MAPKAPK-2 (D1E11) Rabbit mAbRNF15  環(huán)指蛋白15抗體

伊潘立酮(標準品)EML4 (D7Y8F) XP® Rabbit mAbRNF149  環(huán)指蛋白149抗體

亞胺培南Human EGF Neutralizing (D8A1) Rabbit mAbRNF148  環(huán)指蛋白148抗體

亞胺培南(標準品)Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)RNF144  E3泛素蛋白連接酶144A抗體

吲達帕胺LLGL1 (D2B5A) Rabbit mAbRNF14  環(huán)指蛋白14抗體

吲達帕胺(標準品)Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb (PE Conjugate)RNF14  環(huán)指蛋白14抗體

(標準品)IL-10 (D13A11) XP® Rabbit mAbRNF139  環(huán)指蛋白139抗體

p190-A RhoGAP (D8Q6C) Rabbit mAbRNF138  環(huán)指蛋白138抗體

鹽酸洛哌丁胺HSP60 (D6F1) XP® Rabbit mAbRNF133  環(huán)指蛋白133抗體
多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT800條/箱

人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:

人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

人抗髓磷脂抗體IgA(AMAIgA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT支

人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAGAb)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100毫克

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