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馬紅球菌PCR檢測試劑盒廠家

產(chǎn)品簡介

馬紅球菌PCR檢測試劑盒廠家
上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:
CRF檢測試劑盒 用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中的含量

更新時間:2021-03-13
訪問次數(shù):548
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產(chǎn)品名稱

 馬紅球菌PCR檢測試劑盒廠家

 英文名稱

 Rhodococcus equiPCR

 貨號

 LZP7230

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
Aluminum tert-butoxide3-硝基鄰苯二甲酸 96%環(huán)庚 97%

DPPH3-硝基鄰苯二甲酸 99%環(huán)庚酮 99%

2-Thiouracil吡唑 99%N,O-雙(*基硅烷基)乙酰胺 95%

Tungsten hexachloride亞硫酸鈣 90%N-(2-羥乙基)乙二胺 99%

TPTZ四乙基米氏酮 99%N-(2-羥乙基)乙二胺 CP

Paclitaxel米氏酮 98%α-糜蛋白酶 800 usp u/mg

EstradiolN-甲基二乙胺 98%α-糜蛋白酶 1000 usp u/mg

HMDSN-甲基二乙胺 99%胰蛋白酶(牛胰臟) potency ≥2500 units/mg

Phenanthrene2-(甲氨基)乙 99%胰蛋白酶(豬胰臟) 1:250

Barium oxide2,2'-硫代雙乙 99%胰蛋白酶(牛胰臟) potency ≥3000 units/mg

Sodium perborate tetrahydrate CP,97.0% ()聚 平均分子量 2.000

Sodium perborate mohydrate AR,99.0%()聚 平均分子量 400

4-Iodophel氯甲酸異酯  97%聚 平均分子量 1000

4-Hydroxybiphenyl氯酯 98%()聚 平均分子量 3000

TEG氯甲酸苯酯 98%聚 平均分子量 4000

Sodium ligsulfonate二酸 Standard for GC,>99.8%(T)3-氨基 99%

糊精;白糊精Toll-like Receptor 9 (D9M9H) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Plastin L  淋巴細胞胞漿蛋白LCP1抗體

鹽酸芐達明SimpleChIP® Enzymatic Cell Lysis Buffers A & BPlasmigen  纖維蛋白溶酶原抗體

葡聚糖凝膠G-50;交聯(lián)葡聚糖G-50(中顆粒)SignalSilence® Rheb siRNA IIPLAP/Phospholipase A2 activator protein  磷脂酶A2激活蛋白抗體

葡聚糖凝膠G-50;交聯(lián)葡聚糖G-50(粗顆粒)PATL1/PAT1b (D8P1B) Rabbit mAbplant lectin B4/IB4  植物凝集素IB4

L-(+)-扁桃酸;S-扁桃酸Akt3 (E2B6R) Rabbit mAbPlakophilin 2  橋粒斑菲素蛋白2抗體

D-(-)-扁桃酸;R-扁桃酸T-Bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Plakophilin 1  橋粒斑菲素蛋白1抗體

1-氨基海因鹽酸鹽;AHD,1-氨基乙內(nèi)酰脲鹽酸鹽Miz-1 (D7E8B) Rabbit mAbPLAGL2  多形性腺瘤基因樣蛋白2抗體

1-氨基海因鹽酸鹽(標準品)PSMD11 (D1T1R) Rabbit mAbPLAGL1/ZAC1  多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體

人促腎上腺皮質(zhì)激素(1-24),替可克肽Gephyrin AntibodyPLAG1  多型性腺瘤基因1蛋白抗體

緩激肽T-Bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PKN2  蛋白激酶N2抗體
馬紅球菌PCR檢測試劑盒廠家兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT,避光100克

兔環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:5毫克

兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100毫克

兔基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500克

兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT5克

兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT10克

兔抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1公斤
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

 

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